酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, 简称ELISA）是一种广泛应用于生物、诊断实验及临床检验中的技术方法。ELISA试剂盒是为执行ELISA试验而设计的标准化工具，它包含了所有必要的试剂和反应材料，旨在通过检测目标抗原或抗体与特定试剂之间的相互作用，提供定量或定性的分析结果。ELISA试剂盒的使用简化了实验流程，减少了手动操作的复杂性，并保证了检测结果的可靠性和一致性。

1. ELISA试剂盒的组成

ELISA试剂盒通常包括以下几个主要组件，确保实验能够顺利进行：

1.1 微孔板

• 微孔板通常为96孔或384孔的格式，每个孔可以容纳一定量的样本和试剂。
• 板子的材料通常为聚苯乙烯或聚丙烯，具有良好的吸附性能。表面经过特殊处理，可以高效地结合抗原或抗体。
• 微孔板通常为96孔的形式，但也有12孔、24孔等其他规格的板子，便于不同实验规模的需求。

1.2 捕获抗体或抗原

• 捕获抗体或抗原是用于固定在微孔板表面上的关键成分，目的是结合和捕捉样本中对应的抗原或抗体。
• 捕获抗体/抗原通常是高度特异性的，能够有效识别并结合目标分子。

1.3 样本稀释液

• 样本稀释液用于稀释血清、血浆或其他样本。它帮助在适当浓度范围内进行分析，确保反应的灵敏度和特异性。
• 样本稀释液通常会包含缓冲盐溶液、蛋白质（如牛血清白蛋白）、防腐剂等成分，以提高稳定性和减少干扰。

1.4 标准品

• 标准品是已知浓度的目标抗原或抗体，通常用于构建标准曲线。
• 标准曲线有助于定量测定未知样本中目标分子的浓度。标准品的浓度通常覆盖实验的整个范围。

1.5 检测抗体或抗原

• 检测抗体或抗原通常是标记有酶（如HRP（辣根过氧化物酶）或AP（碱性磷酸酶））的 抗体。它与目标抗原或抗体发生特异性结合，并参与最终的信号反应。
• 酶标记物用于在后续的检测步骤中产生可测量的信号。

1.6 底物溶液

• 底物溶液用于与酶反应，产生可视化信号（如颜色变化）。常见的底物包括TMB（四甲基联苯胺）、OPD（邻苯二胺）等。
• 反应的颜色变化或发光信号的强度可以通过光密度（OD值）来测量，进而与样品中的目标分子浓度相关联。

1.7 洗涤液

• 洗涤液用于在每一步反应后清除未结合的非特异性物质，减少背景干扰，提高试验的准确性。
• 洗涤液通常是含有缓冲液的盐溶液，确保在清洗过程中不影响抗原或抗体的结合。

1.8 封闭液

• 封闭液用于在反应开始前封闭微孔板上未被抗体或抗原占据的空位，减少非特异性吸附。
• 封闭液通常由牛血清白蛋白（BSA）或其他封闭剂组成，能有效阻止背景干扰。

2. ELISA试剂盒的工作原理

ELISA的工作原理基于抗原和抗体之间的特异性结合，通过酶促反应产生可检测的信号。ELISA实验通常包括以下几个步骤：

1. 抗原或抗体的固定：捕获抗体或抗原被固定在微孔板的孔底，确保它能够与样本中的目标分子特异性结合。
2. 样本添加：待测样本被加入到微孔板中，样本中的目标分子（抗原或抗体）与固定在板上的捕获分子结合。
3. 洗涤步骤：通过洗涤去除未结合的分子，确保反应的特异性。
4. 二抗的添加：添加酶标记的检测抗体，检测抗体与目标抗原结合，形成免疫复合物。
5. 再次洗涤：去除未结合的检测抗体，减少背景干扰。
6. 底物反应：加入底物溶液，酶催化底物反应生成可检测的信号，通常表现为颜色变化。
7. 结果分析：使用酶标仪（如分光光度计）测量信号强度（如OD值），与标准曲线对比得出样本中目标分子的浓度。

1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞 迅速小心地分离。

2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存:如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。