ELISA试剂盒的工作原理

ELISA试剂盒的工作原理基于抗原与抗体的特异性结合。通常，ELISA方法可以分为以下几个步骤：

1. 包被抗原/抗体：首先，将特定抗原或抗体固定在微孔板的孔内，通常通过物理吸附或化学交联的方式进行。
2. 样品加入与结合：加入待测样品（如血清、尿液等），样品中的目标抗体或抗原会与孔内的抗原或抗体发生特异性结合。
3. 洗涤与去除未结合物质：洗涤步骤用于去除未结合的成分，确保实验结果的准确性。
4. 酶标记二抗的加入：加入酶标记的二抗（通常是与目标物质结合的二级抗体），二抗通过与目标抗体或抗原的结合形成复合物。
5. 底物反应：加入酶底物，底物与酶反应生成可测量的信号，通常为颜色变化。颜色变化的程度与样品中目标物质的浓度成正比。
6. 终止反应与测量：通过加入终止液停止反应，然后使用酶标仪（如光谱光度计）测量每孔的光吸收值（OD值）。
   

   ELISA试剂盒的组成

   ELISA试剂盒通常包含了所有进行ELISA实验所需的试剂和配套材料。其主要组成部分包括：

   • 微孔板：ELISA试剂盒通常配备有预涂有抗原或抗体的96孔微孔板。微孔板是试剂盒的核心部分，用于容纳和固定抗原或抗体。
   • 标准品：标准品用于绘制标准曲线，帮助定量样本中的抗原或抗体。标准品通常包含已知浓度的目标物质。
   • 缓冲液：ELISA试剂盒会包含用于稀释样本和标准品的缓冲液，以保持实验过程中的pH值稳定，确保实验的准确性。
   • 酶标记抗体/抗原：用于检测的抗体或抗原会与酶（如辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶AP）连接。酶通过催化底物反应生成可视信号（如颜色变化），信号强度与目标物质的浓度成正比。
   • 底物溶液：底物溶液是与酶反应后生成可测量信号的化学物质。不同的酶会有不同的底物。例如，HRP通常使用过氧化氢和某些有色底物产生可见光信号。
   • 终止液：用于停止酶反应，通常含有酸性物质，能够立即停止底物的反应，确保测量时信号稳定。
   
   

1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞 迅速小心地分离。

2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存:如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。